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细胞功能检测

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Q&A

  细胞凋亡

  在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与PS具有高度亲和力,因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素(FITC、APC等)标记作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生;碘化丙啶(PI)不能透过完整的细胞膜,而对于凋亡中晚期的细胞和死细胞,细胞膜结构不完整,PI能够透过细胞膜而使细胞核染色。因此将Annexin V与PI匹配使用,可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

 

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  细胞周期

  细胞在有丝分裂的过程中DNA会加倍。在细胞周期中,G0/G1期为DNA合成前期(2N)、S期为DNA合成期(2N-4N),G2/M期为DNA合成后期(4N);根据细胞各个时期DNA含量的不同,通过核酸染料标记DNA,可以对细胞周期进行检测。

 

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  细胞增殖/细胞毒实验

  细胞增殖是生命的基本特征,机体修复、个体发育、种族繁衍都离不开细胞增殖,体外监测细胞的增殖对于基础研究和临床研究都极有价值。细胞毒实验是一种在体内、外研究具有杀伤靶细胞功能的免疫细胞、药物、放射线等影响的实验技术。细胞增殖/细胞毒实验常采用CFSE、BrdU等标记染色进行流式检测或显微成像,或使用MTT、CCK-8方法间接反映活细胞数量的方法检测。其中EdU法是最新的细胞增殖检测方法。

 

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  服务说明

服务项目内容

客户提供材料

服务周期

细胞增殖/毒性

细胞、分组、处理方法、试剂盒等

1-2周

细胞凋亡检测

细胞、分组情况、检测试剂盒等

2-3个工作日

细胞周期检测

细胞、分组情况、固定剂、检测试剂盒等

2-3个工作日

数据分析

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周期

样本类型

样本要求

注意事项

细胞

培养中的细胞

培养瓶内加满细胞培养液,拧紧瓶盖,封口膜封口

市内运送请保持4℃(若是冰袋,需做好物理隔离,避免冻住),2小时内送至我方实验室;若寄送样本,只能是冻存细胞,干冰运输

细胞悬液

对数生长期的贴壁细胞经胰酶消化成(或悬浮细胞不经胰酶)单细胞悬液、PBS洗涤后,进行活细胞计数,活力>80%,调整细胞浓度为(1-10)×106细胞/mL

冻存细胞

 

干冰寄送

血液

全血

抗凝全血(体积需根据具体检测项目类型进行沟通),确认血液无凝血、无溶血

1.若需检测胞内细胞因子,抗凝血建议使用肝素抗凝管,避免使用EDTA抗凝管;
2.血样的运送过程中,避免剧烈碰撞,避免温度急升急降,保持在4℃环境(若是冰袋,需做好物理隔离避免血样冻住),24h内送至我方实验室;
3.若无法立即检测,需冻存,不能直接全血冻,需分离PBMC后再冻存;冻存样本需干冰运输。

血浆/血清

静置或离心全血,取上清200-1000μL于EP管中,编号冻存(-20℃保存一个月,-80℃保存3个月左右)

PBMC

裂红液裂红或者淋巴分离液分离获得PBMC,冻存

其他液体(如腹水、脑脊液、培养细胞上清等)

细胞水平流式

离心富集细胞、清洗、重悬、活细胞计数,活力>80%,调整细胞浓度为(1-10)×106细胞/mL

市内运送请保持4℃,2小时内送至我方实验室;若寄送样本,只能是冻存样本,干冰运输

液相细胞因子检测

离心后,收集上清200-1000μL于EP管中,编号冻存(-20℃保存一个月,-80℃保存3个月左右)

组织样(脾、淋巴结、肺、皮下瘤等)

新鲜组织不小于0.5cm ×0.5cm ×0.5cm,剔除坏死组织并清洗干净血液;组织保存液保存,保持在4℃环境(若是冰袋,需做好物理隔离避免组织冻住),48h内送至我方实验室

1.新鲜组织样就地取材,1h内尽快使用保存液进行保存;
2.若样本48h内无法进行检测,需冻存,不能直接冻组织,需自行处理成单细胞悬液后,冻存,干冰运输

植物样本

1.新鲜幼嫩叶片最佳,根茎亦可;
2.可整株低温寄送;
3.若为野外采摘,用湿滤纸包裹4℃运输;
4.若为寄生培养植株,建议带盆整株低温运输;
5.除了待测目标样本,做倍性必须送同源近亲物种做参照样本;
6.做基因组大小检测需提供已知基因组大小的同源近亲物种做参照,也可提供已知且稳定的基因组大小物种做参照,如拟南芥等。

针对植物倍性和基因组大小流式分析检测,分选不涉及

  Q1:你们能做流式吗?

  A1:流式分析和流式分选都可以做。我们有高配置的2台流式分析仪,一台流式分选仪。

  Q2:怎么预约仪器?

  A2:流式检测实行网上注册预约,网址为http://113.57.167.115:8081;先注册课题组(不是个人)。公司需写全称,学校写校名全称+院系/科室+课题组名字;审核激活后,可直接用课题组账号提前一周在网上预约仪器(流式分析是cytoflex S/LX分析型流式细胞仪两台,流式分选是Moflo分选型流式细胞仪),也可以添加个人账号预约仪器。

  Q3:没有做过,能帮忙培训吗?

  A3:可以的,预约后准点到达实验室,联系我们进行仪器操作培训1-2次。后续您可以用模板自己上机。

  Q4:怎么计费,结果如何交付?

  A4:按需预约,按时上机,按实际使用机时计费,15min为计时单位。检测结束后,格式化的光盘/U盘/硬盘自行拷贝,第三方软件自行分析。

  Q5:流式分选样本如何准备,有什么要求吗?需要自带什么试剂耗材?

  A5:样本处理和染色过程在需在无菌环境操作,并尽量低温保证细胞活性。上样前必须无菌过滤(有偿提供带滤网流式管);收集分选细胞的试管或多孔板也要无菌,最好10%小牛血清封闭4度过夜,使用前弃去;推荐细胞重悬在培养基/生理盐水/PBS,若加血清,含量不能超过2%,以免堵塞喷嘴;分选时需自行携带无菌枪头、 已加好培养液/接收液的接收管/板(足量)、备用培养液/接收液前来分选。

  Q6:细胞大概有10的7次方,需要分选多长时间?

  A6:尽量浓缩分选的起始样本,推荐样本中细胞浓度<1 x 107/ml,不足1 x 107/ml,重悬至300-500ul,若为2 x 107/ml,重悬至2ml,以此类推;1ml需要分选30分钟左右。

  Q7:能分选到10的5次方目的细胞吗?

  A7:这个需要看您的起始准备细胞量和目的细胞比例,以及仪器分选时的效率来大概估算。比如说需要获得的细胞量 A ,分选效率B,目标细胞比例C,大致推算起始细胞量D为A/(B×C)。

  Q8:流式分选的上样管、接收管、接收液推荐用什么?接收液体积该加多少?

  A8:上样管仅支持流式管,上样前必须无菌过滤(有偿提供带滤网流式管);接收管支持pcr管、1.5ml/15ml/50ml离心管、6-1536孔板、玻片;接收液必须加,可用培养基、下游实验需要的缓冲液等。

  Q9:那接收液体积该加多少?

  A9:接收液体积按目标细胞接收量(如目的细胞能收集10的5次方,15ml 离心管建议加5ml接收液;96孔板收集单细胞,建议加100-200 ul 接收液)、下游检测目的(如Smart-Seq只需微量接收体系接收;若有细胞数量和体积要求,可大致按1000个微滴5ul)。

  Q10:样本特别多,流式分析可以用96孔板上样吗?

  A10:可以的,我们配备的Cytoflex LX这台除了6激光23个滤光片的高配置外,还加载了96孔板上样器,能兼容流式管、96孔平底板、U型板、V底板。可解放您的双手,节省您的上机时间。

  以上为委托检测。整体流式项目(从给样到结果交付)需具体咨询,一项一议。

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