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免疫水平评估

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Q&A

  随着基因表达技术的诞生,新的单抗以及荧光素的获得,同一样本检测多个marker(最常见的人外周血免疫细胞分型),或者多个参数确定目的细胞(如Treg细胞)通过多色流式得以实现。基于流式细胞术的多指标高通量检测特点,同样也能实现对多种胞内或胞外细胞因子的检测,最大程度地节省样本量,缩短人工操作时间,做到准确定量分析。

  相比于传统的ELISA方法,多因子方式具有“多”,“快”,“好”,“省”四个优势;可同时检测13种细胞因子,从实验操作到最终获得数据结果只需要8个小时,且灵敏度高,特异性强;每个样本只需25μl就能够同时检测13个指标,大大节省了样本的用量及实验费用。

 

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       服务说明

服务项目内容

客户提供材料(10个样本以内)

服务周期

全血分离PBMC

全血等

1个工作日

胞膜染色

细胞、分组情况、抗体等

1-2个工作日

胞/核内染色

细胞、分组情况、刺激方法、固定破膜剂、抗体等

1-3个工作日

流式分析上机

孵育抗体的细胞、分组情况等

1-2个工作日

流式分选上机

孵育抗体的细胞、分组情况、接收装置等

1-2个工作日

胞内细胞因子检测

细胞、需检测因子、刺激处理方法、刺激、阻断、固定、破膜等试剂盒、带说明书抗体等

3-5个工作日

胞外多因子检测

血清或培养液上清等样品、多因子试剂盒等

1-2个工作日

数据分析

/

1-3个工作日


  

持续更新中,敬请期待...

 

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人外周血T/B/NK分型及比例分析

 

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胞外细胞因子检测

 

 

 

肿瘤组织T细胞分型

 

 

脾脏Th1/Th2细胞因子检测

 

 

血浆多种细胞因子检测

 

干细胞表型鉴定

样本类型

样本要求

注意事项

细胞

培养中的细胞

培养瓶内加满细胞培养液,拧紧瓶盖,封口膜封口

市内运送请保持4℃(若是冰袋,需做好物理隔离,避免冻住),2小时内送至我方实验室;若寄送样本,只能是冻存细胞,干冰运输

细胞悬液

对数生长期的贴壁细胞经胰酶消化成(或悬浮细胞不经胰酶)单细胞悬液、PBS洗涤后,进行活细胞计数,活力>80%,调整细胞浓度为(1-10)×106细胞/mL

冻存细胞

 

干冰寄送

血液

全血

抗凝全血(体积需根据具体检测项目类型进行沟通),确认血液无凝血、无溶血

1.若需检测胞内细胞因子,抗凝血建议使用肝素抗凝管,避免使用EDTA抗凝管;
2.血样的运送过程中,避免剧烈碰撞,避免温度急升急降,保持在4℃环境(若是冰袋,需做好物理隔离避免血样冻住),24h内送至我方实验室;
3.若无法立即检测,需冻存,不能直接全血冻,需分离PBMC后再冻存;冻存样本需干冰运输。

血浆/血清

静置或离心全血,取上清200-1000μL于EP管中,编号冻存(-20℃保存一个月,-80℃保存3个月左右)

PBMC

裂红液裂红或者淋巴分离液分离获得PBMC,冻存

其他液体(如腹水、脑脊液、培养细胞上清等)

细胞水平流式

离心富集细胞、清洗、重悬、活细胞计数,活力>80%,调整细胞浓度为(1-10)×106细胞/mL

市内运送请保持4℃,2小时内送至我方实验室;若寄送样本,只能是冻存样本,干冰运输

液相细胞因子检测

离心后,收集上清200-1000μL于EP管中,编号冻存(-20℃保存一个月,-80℃保存3个月左右)

组织样(脾、淋巴结、肺、皮下瘤等)

新鲜组织不小于0.5cm ×0.5cm ×0.5cm,剔除坏死组织并清洗干净血液;组织保存液保存,保持在4℃环境(若是冰袋,需做好物理隔离避免组织冻住),48h内送至我方实验室

1.新鲜组织样就地取材,1h内尽快使用保存液进行保存;
2.若样本48h内无法进行检测,需冻存,不能直接冻组织,需自行处理成单细胞悬液后,冻存,干冰运输

植物样本

1.新鲜幼嫩叶片最佳,根茎亦可;
2.可整株低温寄送;
3.若为野外采摘,用湿滤纸包裹4℃运输;
4.若为寄生培养植株,建议带盆整株低温运输;
5.除了待测目标样本,做倍性必须送同源近亲物种做参照样本;
6.做基因组大小检测需提供已知基因组大小的同源近亲物种做参照,也可提供已知且稳定的基因组大小物种做参照,如拟南芥等。

针对植物倍性和基因组大小流式分析检测,分选不涉及

  Q1:你们能做流式吗?

  A1:流式分析和流式分选都可以做。我们有高配置的2台流式分析仪,一台流式分选仪。

  Q2:怎么预约仪器?

  A2:流式检测实行网上注册预约,网址为http://113.57.167.115:8081;先注册课题组(不是个人)。公司需写全称,学校写校名全称+院系/科室+课题组名字;审核激活后,可直接用课题组账号提前一周在网上预约仪器(流式分析是cytoflex S/LX分析型流式细胞仪两台,流式分选是Moflo分选型流式细胞仪),也可以添加个人账号预约仪器。

  Q3:没有做过,能帮忙培训吗?

  A3:可以的,预约后准点到达实验室,联系我们进行仪器操作培训1-2次。后续您可以用模板自己上机。

  Q4:怎么计费,结果如何交付?

  A4:按需预约,按时上机,按实际使用机时计费,15min为计时单位。检测结束后,格式化的光盘/U盘/硬盘自行拷贝,第三方软件自行分析。

  Q5:流式分选样本如何准备,有什么要求吗?需要自带什么试剂耗材?

  A5:样本处理和染色过程在需在无菌环境操作,并尽量低温保证细胞活性。上样前必须无菌过滤(有偿提供带滤网流式管);收集分选细胞的试管或多孔板也要无菌,最好10%小牛血清封闭4度过夜,使用前弃去;推荐细胞重悬在培养基/生理盐水/PBS,若加血清,含量不能超过2%,以免堵塞喷嘴;分选时需自行携带无菌枪头、 已加好培养液/接收液的接收管/板(足量)、备用培养液/接收液前来分选。

  Q6:细胞大概有10的7次方,需要分选多长时间?

  A6:尽量浓缩分选的起始样本,推荐样本中细胞浓度<1 x 107/ml,不足1 x 107/ml,重悬至300-500ul,若为2 x 107/ml,重悬至2ml,以此类推;1ml需要分选30分钟左右。

  Q7:能分选到10的5次方目的细胞吗?

  A7:这个需要看您的起始准备细胞量和目的细胞比例,以及仪器分选时的效率来大概估算。比如说需要获得的细胞量 A ,分选效率B,目标细胞比例C,大致推算起始细胞量D为A/(B×C)。

  Q8:流式分选的上样管、接收管、接收液推荐用什么?接收液体积该加多少?

  A8:上样管仅支持流式管,上样前必须无菌过滤(有偿提供带滤网流式管);接收管支持pcr管、1.5ml/15ml/50ml离心管、6-1536孔板、玻片;接收液必须加,可用培养基、下游实验需要的缓冲液等。

  Q9:那接收液体积该加多少?

  A9:接收液体积按目标细胞接收量(如目的细胞能收集10的5次方,15ml 离心管建议加5ml接收液;96孔板收集单细胞,建议加100-200 ul 接收液)、下游检测目的(如Smart-Seq只需微量接收体系接收;若有细胞数量和体积要求,可大致按1000个微滴5ul)。

  Q10:样本特别多,流式分析可以用96孔板上样吗?

  A10:可以的,我们配备的Cytoflex LX这台除了6激光23个滤光片的高配置外,还加载了96孔板上样器,能兼容流式管、96孔平底板、U型板、V底板。可解放您的双手,节省您的上机时间。

  以上为委托检测。整体流式项目(从给样到结果交付)需具体咨询,一项一议。

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