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靶向代谢组学

靶向代谢组学

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  靶向代谢组学分析主要是以标准品为参照,对指定列表的代谢产物,特别针对一种或几种途径的代谢产物进行有针对性地、特异性地检测与分析。

  靶向代谢组学分析成功的关键因素是准确度、高通量和可靠性。虽然这类分析比代谢谱分析更为常规,但必须面对非常大量(成千上万)的样品。

  靶向代谢组学可以应用于:

  (1)验证由发现代谢组学实验提出的假说;

  (2)进行基于假说的探索性实验(通常根据最新的解释),针对特定代谢物,研究代谢模型。

 

  基本研究流程

  靶向代谢组学研究流程主要可分为样品收集、标准曲线建立、代谢物提取和分离、上机检测和数据分析等。

 

 

  样本类型

  血清 • 血浆 • 尿样 • 脑脊液 • 唾液 • 粪便 •微生物 • 细胞 • 植物 • 组织 • 其它

 

  服务周期

  样本库提供的靶向代谢组学服务和周期见下表:

样本库提供的靶向代谢组学服务和周期

平台

仪器型号

代谢物

化合物数目

检测周期

检测价格

GC-MS

Aglient 8890-7010B

脂肪酸

37种脂肪酸

约15个工作日

请询价

碳水化合物

果糖, 葡萄糖等13种

UPLC-QQQ MS

SCIEX QTRAP 4500或Triple Quad 4500

有机酸

乙酸, 苹果酸等

约20个工作日

请询价

氨基酸

超过20种

多胺类物质

13种

胆汁酸

66种

肉类标志物(TMAO等)

7种

 

      可提供的靶向代谢组学服务:

48种胆汁酸绝对定性定量分析

编号

简称

常用名

编号

简称

常用名

1

DLCA

Dehydrolithocholic acid

25

3β-CA

3β-Cholic Acid

2

LCA

Lithocholic acid

26

α-MCA

α-Muricholic acid

3

ILCA

Isolithocholic acid

27

12-DHCA

12-Dehydrocholic acid

4

NDCA

23-Nordeoxycholic acid

28

λ-MCA (HCA)

λ-Muricholic acid

5

6-KLCA

6-Ketolithocholic acid

29

CA

Cholic acid

6

7-KLCA

7-Ketolithocholic acid

30

AlCA

Allocholic acid

7

12-KLCA

12-Ketolithocholic acid

31

GLCA

Glycolithocholic acid

8

ApCA

Apocholic acid

32

GCDCA

Glycochenodeoxycholic acid

9

MoCA

Murocholic acid

33

TLCA

Taurolithocholic acid

10

TCDCA-d5

Taurochenodeoxycholic-d5 acid

34

GHDCA

Glycohyodeoxycholic acid

11

β-HDCA

β-Hyodeoxycholic Acid

35

GDHCA

Glycodehydrocholic acid

12

UDCA

Ursodeoxycholic acid

36

λ-GMCA (GHCA)

Glyco-λ-muricholic acid

13

CDCA

Chenodeoxycholic acid

37

TDCA

Taurodeoxycholic acid

14

DHCA

Dehydrocholic acid

38

GUDCA

Glycoursodeoxycholic acid

15

HDCA

Hyodeoxycholic acid

39

TUDCA

Tauroursodeoxycholic acid

16

IDCA

Isodeoxycholic acid

40

THDCA

Taurohyodeoxycholic acid

17

NCA

23-Norcholic acid

41

TCA

Taurocholic acid

18

DCA

Deoxycholic acid

42

GDCA

Glycodeoxycholic acid

19

DiLCA

Dioxolithocholic acid

43

TDHCA

Taurodehydrocholic acid

20

6,7-DKLCA

6,7-Diketolithocholic acid

44

α-TMCA

Tauro-α-muricholic acid

21

7-KDCA

7-Ketodeoxycholic acid

45

β-TMCA

Tauro-β-muricholic acid

22

β-MCA

β-Muricholic acid

46

λ-TMCA

Tauro-λ-muricholic acid

23

3-DHCA

3-Dehydrocholic acid

47

ω-TMCA

Tauro-ω-muricholic acid

24

UCA

Ursocholic acid

48

GCA

Glycocholic acid

 

37种脂肪酸绝对定性定量分析

编号

中文名称

英文名称

简写

1

丁酸

butyric acid

C4:0

2

己酸

caproic acid

C6:0

3

辛酸

caprylic acid

C8:0

4

癸酸

capric acid

C10:0

5

十一烷酸

undecanoic acid

C11:0

6

月桂酸

lauric acid

C12:0

7

十三烷酸

tridecanoic acid

C13:0

8

十四酸

myristic acid

C14:0

9

十四碳烯酸

myristoleic acid

C14:1n5

10

十五烷酸

pentadecanoic acid

C15:0

11

顺-10-十五碳烯酸

cis-10-pentadecenoic acid

C15:1n5

12

棕榈酸

palmitic acid

C16:0

13

棕榈油酸

palmitoleic acid

C16:1n7

14

十七烷酸

heptadecanoic acid

C17:0

15

顺-10-十七烯酸

cis-10-heptadecenoic acid

C17:1n7

16

硬脂酸

stearic acid

C18:0

17

反油酸

elaidic acid

C18:1n9t

18

油酸

oleic acid

C18:1n9c

19

反亚油酸

linolelaidic acid

C18:2n6t

20

亚油酸

linoleic acid

C18:2n6c

21

γ-亚麻酸

r-linolenic acid

C18:3n6

22

α-亚麻酸

α-linolenic acid

C18:3n3

23

花生酸

arachidic acid

C20:0

24

顺-11-二十碳烯酸

cis-11-eicosenoic acid

C20:1

25

顺-11,14-二十碳二烯酸

cis-11,14-eicosadienoic acid

C20:2

26

顺-8,11,14-二十碳三烯酸

cis-8,11,14-eicosatrienoic acid

C20:3n6

27

花生四烯酸

arachildonic acid

C20:4n6

28

二十一烷酸

heneicosanoic acid

C21:0

29

顺-11,14,17-二十碳三烯酸

cis-11,14,17-eicosatrienoic acid

C20:3n3

30

顺-5,8,11,14,17-二十碳三烯酸

cis-5,8,11,14,17-eicosatrienoic acid

C20:5n3

31

山萮酸

behenic acid

C22:0

32

芥酸

erucic acid

C22:1n9

33

顺-13,16-二十二碳二烯酸

cis-13,16-docosadienoic acid

C22:2

34

三十烷酸

tricosanoic acid

C23:0

35

顺-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸

cis-4,7,10,13,16,19-docosahexaenoic acid

C22:6n3

36

二十四碳酸

lignceric acid

C24:0

37

神经酸

nervonic acid

C24:1n9

 

11种短链脂肪酸绝对定性定量分析

序号

中文名称

英文名称

分子式

CAS号

相对分子质量

1

乙酸

acetic acid

C2H4O2

64-19-7

60.05

2

丙酸

propionic acid

C3H6O2

79-09-4

74.08

3

异丁酸

isobutyric acid

C4H8O2

79-31-2

88.11

4

丁酸

n-butyric acid

C4H8O2

107-92-6

88.11

5

异戊酸

isovaleric acid

C5H10O2

503-74-2

102.13

6

戊酸

n-valeric acid

C5H10O2

109-52-4

102.13

7

4-甲基戊酸

4-methylvaleric acid

C6H12O2

646-07-1

116.16

8

正己酸

hexanoic acid

C6H12O2

142-62-1

116.15

9

2-甲基己酸

2-methylhexanoic acid

C7H14O2

4536-23-6

130.18

10

正庚酸

n-heptylic acid

C7H14O2

111-14-8

130.18

11

正辛酸

n-octanoic acid

C8H16O2

124-07-2

144.21

 

32种氨基酸绝对定性定量分析

编号 

中文名称 

英文名称 

缩写 

1

丙氨酸

alanine

ALA

2

肌氨酸

sarcosine

SAR

3

甘氨酸

glycine

GLY

4

α-氨基丁酸

α-aminobutyric acid

ABA

5

缬氨酸

valine

VAL

6

β-氨基异丁酸

β-aminobutyric acid

β-AIB

7

亮氨酸

leucine

LEU

8

别异亮氨酸

allo-isoleucine

aILE

9

异亮氨酸

isoleucine

ILE

10

苏氨酸

threonine

THR

11

丝氨酸

serine

SER

12

脯氨酸

proline

PRO

13

天冬酰胺

asparagine

ASN

14

硫代脯氨酸

thioproline

TPR

15

天冬氨酸

aspartic acid

ASP

16

蛋氨酸

methionine

MET

17

羟基脯氨酸

4-hydroxyproline

4-HYP

18

谷氨酸

glutamic acid

GLU

19

苯丙氨酸

phenylalanine

PHE

20

α-氨基己二酸

ɑ-aminoadipic acid

AAA

21

α-氨基庚二酸

ɑ-aminopimelic acid

APA

22

谷氨酰胺

glutamine

GLN

23

鸟氨酸

ornithine

ORN

24

甘氨酰-脯氨酸(二肽)

glycyl-proline

GPR

25

赖氨酸

lysine

LYS

26

组氨酸

histidine

HIS

27

羟基赖氨酸

hydroxylysine

HLY

28

酪氨酸

trrosinre

TYR

29

脯氨酸-羟基脯氨酸(二肽)

proline-hydroxyproline

PHP

30

色氨酸

tryptophan

TRP

31

胱硫醚

cystathionine

CTH

32

胱氨酸

cystine

C-C

 

 

12种水溶性维生素绝对定性定量分析

编号

物质名称

英文名称

分子量

1

VB1硫胺素

thiamine

264.35

2

VB2核黄素

Riboflavin

376.36

3

VB3烟酰胺

Nicotinamide

122.12

4

VB5泛酸

(R)-pantothenicacid

219.24

5

VB6吡哆胺

pyridoxamine

168.19

6

VB6吡哆醇

Pyridoxine

169.18

7

VB6吡哆醛

pyridoxal

167.16

8

VB7生物素

Biotin

244.31

9

VB9叶酸

folic acid

441.40

10

VB12钴胺素碎片

Vitamin B12

1355.37

11

对氨基苯甲酸

p-aminobenzoic acid

137.14

12

硫辛酸

thioctic acid

206.33

 

 

27种神经递质绝对定性定量分析

编号

中文名字

英文名字

缩写

分类

CAS号

1

色胺

Tryptamine

-

单胺类吲哚类

61-54-1

2

5-羟色胺

Serotonin hydrochloride

5-HT

单胺类吲哚类

153-98-0

3

5-羟吲哚乙酸

5-hydroxyindoleacetic acid

5HIAA

单胺类吲哚类

54-16-0

4

犬尿喹啉酸

Kynurenic acid

KYNA

单胺类吲哚类

492-27-3

5

褪黑激素

Melatonin

-

单胺吲哚类

73-31-4

6

5-羟基色氨酸

5-Hydroxy-Tryptophan

5-HTP

单胺吲哚类

4350-09-8

7

肾上腺素

Epinephrine

EP

单胺类儿茶酚胺类

329-63-5

8

去甲肾上腺素

noradrenaline bitartrate

NE

单胺类儿茶酚胺类

108341-18-0

9

多巴胺

Dopamine

DA

单胺类儿茶酚胺类

62-31-7

10

高香草酸

homovanillic acid

NMN

单胺类儿茶酚胺类

306-08-1

11

香草扁桃酸

4-hydroxy-S-methoxymandelic acid

VM-A

单胺类儿茶酚胺类

55-10-7

12

去甲变肾上腺素

rac Normetanephrine

-

单胺类儿茶酚胺类

1011-74-1

13

3-甲氧酪胺

3-Methoxy-p-tyramine

-

单胺类儿茶酚胺类

1477-68-5

14

酪胺

Tyramine

-

单胺类儿茶酚胺类

51-67-2

15

二羟苯乙酸

3,4-Dihydroxyphenylacetic acid

DOPAC

单胺类儿茶酚胺类

102-32-9

16

胆碱

Choline Chloride

-

单胺类胆碱类

67-48-1

17

乙酰胆碱

Acetylcholine

Ach

单胺类胆碱类

60-31-1

18

组胺

Histamine

-

氨基酸类

51-45-6

19

犬尿氨酸

Kynurenine

-

氨基酸类

2922-83-0

20

谷氨酰胺

Glutamine

GLN

氨基酸类

56-85-9

21

谷氨酸

Glutamic Acid

GLU

氨基酸类

56-86-0

22

4-氨基丁酸

4-Aminobutyric Acid

GABA

氨基酸类

56-12-2

23

酪氨酸

Tyrosine

TYR

氨基酸类

60-18-4

24

精氨酸

Arginine

Arg

氨基酸类

74-79-3

25

组氨酸

Histidine

HIS

氨基酸类

71-00-1

26

苯基丙氨酸

Phenylalanine

PHE

氨基酸类

63-91-2

27

色氨酸

Tryptophan

TRP

氨基酸类

73-22-3

 

 

10种植物激素绝对定性定量分析

编号

中文名

英文名

简称

1

反-玉米素 

Trans-Zeatin

t-ZT

2

赤霉素 

Gibberellin A3

GA3

3

吲哚乙酸 

3-Indoleacetic acid

IAA

4

水杨酸 

Salicylic acid

SA

5

茉莉酸 

Jasmonic acid

JA

6

脱落酸 

Abscisic acid

ABA

7

吲哚丁酸 

3-Indolebutyric acid

IBA

8

6-苄氨基嘌呤 

6-Benzylaminopurine

6-BA

9

茉莉酸甲酯 

Methyl jasmonate

JA-ME

10

激动素 

6-Furfurylaminopurine

6-KT

 

 

18种辅酶绝对定性定量分析

序号

name

中文名字

1

NAD+

氧化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

2

NADP+

氧化烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸

3

NADH

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸

4

NADPH

还原型酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸

5

ATP

三磷酸腺苷

6

ADP

二磷酸腺苷

7

AMP

一磷酸腺苷

8

Creatinephosphate

磷酸肌酸

9

Creatine

肌酸

10

Creatinine

肌苷

11

2'-deoxyuridine

脱氧尿苷

12

Cytosine

胞嘧啶

13

Adenosine

腺苷

14

Thymine

胸腺嘧啶

15

Cytidine

胞啶

16

Uridine

尿苷

17

Guanosine

鸟苷

18

UMP

尿苷酸

 

 

105种抗生素绝对定性定量分析

物质类别

物质列表

Sulfonamides
(磺胺类:30种)

sulfapyridine, sulfadoxine, sulfathiazole, sulfamethizole, sulfamethazine, sulfadiazine, sulfaquinoxaline, sulfachloro pyridazine, sulfisomidine, sulfadimethoxine, sulfaguanidine, sulfanilamide, sulfacetamide, sulfamerazine, sulfamoxole, succinylsulfathiazole, sulfamethoxazole, sulfamethoxypyridazine, sulfamonomethoxine, sulfisoxazole, sulfanitran, sulfaclozine , sulfameter , trimethoprim, sulfasalazine, N-acetylsulfapyridine, N-acetylsulfadiazine, N-acetylsulfamethazine, N-acetylsulfamethoxazole, N-acetylsulfamerazine

Quinolones
(喹诺酮类:20种)

enrofloxacin, ciprofloxacin, danofloxacin, difloxacin, enoxacin, lomefloxacin, norfloxacin, ofloxacin, pefloxacin, sarafloxacin, sparfloxacin, cinoxacin, moxifloxacin, flumequine, pipemidic acid, nalidixic acid, fleroxacin, oxolinic acid, piromidic acid, levofloxacin

Tetracyclines
(四环素类:14种)

oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline, minocycline, methacycline, doxycycline, 4-epianhydrotetracycline, Isochlortetracycline, 4-epitetracycline, anhydrotetracycline, 4-epianhydrochlortetracycline, 4-epioxytetracycline, α-apo-oxytetracycline, β-apo-oxytetracycline

Macrolides
(大环内酯类:16种)

erythromycin, clarithromycin, clindamycin, roxithromycin, tilmicosin, lincomycin, ormetoprim, oleandomycin, azithromycin, virginiamycin M1, virginiamycin S1, kitasamycin, spiramycin, tylosin, midecamycin, midecamycin

β-lactams
(β-内酰胺类:14种)

Cefalexin, cefradine, cefotaxime, ampicillin, amoxicillin, dicloxacillin, cefazolin, cloxacillin, cefaclor, penicillin V, cefapirin, piperacillin, ceftiofur, penicillin G

Chloramphenicols
(氯霉素类:3种)

chloramphenicol, thiamphenicol, florfenicol

Polypeptides and other antibiotics
(多肽和其他抗生素:8种)

bacitracin A, colistin A, colistin B, furazolidone, monensin, salinomycin, narasin, tiamulin

 

 

  项目优势

  a.标准化技术平台:拥有标准化的实验操作规范和先进的技术平台,实验周期短,质量可靠;

  b.拥有多种先进检测设备:拥有Aglient 7890A/5975C单四级杆气-质联用仪、Aglient 8890-7010B三重四级杆气质联用仪、SCIEX TripleTOF 5600 plus高分辨质谱仪、SCIEX QTRAP 4500和SCIEX Triple Quad 4500三重四级杆质谱系统,以及Agilent 600兆超低温核磁共振波谱仪等代谢组学分析平台;

  c.专业的数据库:拥有多个商业数据库,同时建立了超过百个标准品数据库,使定性更加准确;

  d.多重质控保障:分析过程采用严格的方法验证步骤,多重质控保证实验可靠;

  e.提供个性化服务:拥有专业的生物信息团队和大型计算机,可以为合作伙伴提供个性化的生物信息分析服务;

  f.完善的售后服务:完善的售后服务,从报告解读至文章发表,可全程提供高效高质量的服务;

  g.开发种类多样:已开发出几大类常见代谢物靶向代谢组学分析,如代谢通路、靶向代谢物、植物代谢物、 有机化合物、无机化合物、氧化应激化合物等。

  文献:Mathé EA, et al., Noninvasive urinary metabolomic profiling identifies diagnostic and prognostic markers in lungcancer. 2014, Cancer Research, 74(12):3259-70 (IF=9.32)

  实验材料:

  前期筛选样本(1005例):花费十年(1998~2007)收集样本:469例病人(治疗前尿液)+536例健康人

  后期验证样本(158例):近期(2008–2010)收集的样本:80例病人(治疗前尿液)+78例健康人

  组织样品:48例肿瘤组织及其周边非肿瘤组织

 

  研究流程:

  概述:前期非靶筛选+后期靶向MRM验证

 

  实验流程:

 

1

 

  研究结论:

  前期筛选:前期筛选样品的非靶向代谢组学分析,正离子模式下共检测到1807个信号,负离子检测到1359个。通过对吸烟相关代谢物(Cotinine、Nicotine-N’-oxide和Trans-3’-hydroxycotinine)的检测,发现可以很好的将吸烟人群与非吸烟人群区分开,验证了分析方法的可行性。

 

1

 

  数据分析:

  a.诊断与分型研究:应用统计学分析方法,排除人种和性别的干扰后,作者鉴定到了四个差异代谢物:NANA、Cortisol sulfate、Creatine riboside 和 561+(未鉴定物质)。ROC分析发现四个差异代谢物在所有人群中AUC值在0.63~0.76之间,在I-II期肺癌人群中在0.59~0.70之间。其中用Creatine riboside或者全部四种代谢物预测更加准确(P<0.00001)。

 

1

  Overlap between signals that are predictive of lung cancer status in the training set based on the Random Forests classification.

 

1

  Receiver Operating Characteristic (ROC) analysis of individual metabolites and their combination

 

  b.预后研究:在综合考虑了性别、人种、疾病阶段、组织切片、吸烟史、放化疗、外科手术等多方面因素后作者发现高含量的NANA、Cortisol sulfate、Creatine riboside和561+带来不好的预后效果(存活率低),而且这四种代谢物与存活率的相关性是独立的但却有累加效应;在I-II期肺癌人群中,高含量的Creatine riboside和561+也会降低病人的存活率。

 

1

  Kaplan-Meier survival estimates in the training set are depicted for the top four predictive metabolites

  c.后期验证:同样使用非靶向代谢组学方法,发现在验证人群(80例病人+78例健康人)中Creatine riboside、NANA和561+在病人尿液中的含量都有显著升高。在排除年龄、性别与人种干扰后选择198例样品(92例病人+106例健康人)进行靶向代谢组学,验证了这四种代谢物与疾病的相关性。此外,为证明这四种代谢物的稳定性,作者样品保存两年后再次重复了实验,证明它们临床应用的价值。

 

1

  Abundance and validation of metabolites that were top contributors in the classification of patients as lung cancer or healthy controls.

  d.机理研究方面的延伸:作者最后在肿瘤组织中检测上述四种代谢物的含量,发现与邻近组织相比,肿瘤组织中Creatine riboside和NANA的含量明显升高,同时Creatine的含量也有增加。

 

1

  Linking urinary metabolites to lung cancer tissue metabolome.

  总结:

  本篇文章是非常经典的代谢组生物标志物研究范例,前期非靶向的筛选加上后期的靶向验证,非常值得借鉴学习。

  文章最后从体液类样品再次回归组织类样品,叩开了后期机理研究的大门,这种研究思路也非常值得临床研究借鉴。

持续更新中,敬请期待...

  (1)代谢组学送样量参考标准

检测策略/方法

血样

尿液

脑脊液

粪便 

微生物

细胞

组织

植物

非靶向代谢组

500ul

1ml

200ul

2g

250mg

107

250mg

250mg

靶向代谢组

500ul

1ml

200ul

2g

250mg

107

250mg

250mg

NMR代谢组

500ul

1ml

500ul

2g

500mg

107

500mg

500mg

 

  (2)代谢组学送样生物学重复性要求

  代谢组的差异变化是基因组变化放大效应的呈现,不同个体中代谢物的波动性也就较大。另一方面,代谢组学的差异分析一般是基于PCA和PLS-DA等多元统计分析方法进行的,只有较大的样本量抽提出的主成分才具有群体代表性。因此,相对于基因组学等技术方法,代谢组学要求样品的生物学重复要更多。

  a.临床标本大于30例;

  b.模式动物样品大于10例;

  c.植物微生物样品每组大于8例;

  d.细胞样品大于6例。

 

  (3)代谢组学送样品收集标准

样本类型

收集标准

血液

血清

静脉抽血3~4mL,置于采血管内(不放置任何抗凝剂及促凝剂);4℃静置30~60min(不超过2h),待血液凝固;3500rpm、4℃,离心10 分钟,待血细胞完全沉降后,吸取上层血清,保存于-80℃保存。

血浆

采集血液样本,置于含有适量抗凝剂(慎用Citrate 抗凝剂;NMR检测推荐用Heprin抗凝剂;质谱检测推荐用EDTA抗凝剂(K2、K3、Na、绝对不有Li)的采集管内;反复颠倒采血管,使抗凝剂与血液充分混匀;以2000-3000rpm离心10 min(血样采集后室温放置1h之内进行离心;血样采集后冰上放置可以在4 h内进行处理),上清液即为血浆;保存于-80℃冰箱。

尿液

 收集尿液(严禁加入叠氮钠等抑菌剂以免对质谱测试产生干扰)置离心管(推荐用PP材料)中,10000rpm、4℃,离心10 分钟,取上清液,置-80℃保存。建议在送样代谢组学 检测同时进行尿肌酐的检测。

其它体液样本

收集过程尽量不添加其它试剂,收集至离心管后液氮速冻,置-80℃保存。

细胞

贴壁细胞(每皿细胞量不少于1.0E7)

处理前将每皿细胞计数,弃去培养皿 中的培养液,每皿加入10ml 去离子水洗去培养基,震摇2s(不要过于激烈,防 止细胞破裂),加入15ml 的液氮淬灭(2mins),加入1.5ml,-80℃预冰的甲醇, 用刮刀刮。

不贴壁的细胞

将混悬液完整转移至1.5ml 的离心管中,4 °C,13000rpm 离心10min,取固定体积上清液(每皿取等量体积,尽量多取,比如0.8mL), 置1.5mL 离心管中,置-80℃保存。同时,将细胞碎片称重予以记录。

细胞培养液(2mL/例)

将每皿待测细胞培养液吸取固定体积,置2mL 离心管, 10000rpm、4℃,离心10 分钟,取上清液,-80℃保存。

粪便

 从粪便的不同部位挑取3个点,称重,置离心管中(严禁加入叠氮钠等抑菌剂以免对质谱测试产生干扰),-80℃保存。

组织

动物组织样本

全程冰上操作,尽量减少操作时间。去除血液(心、肝、肾、 肺可行心脏灌流,其他组织可用预冷PBS 淋洗数次)干扰,置液氮速冻,-80℃ 保存。

人组织样本及肿瘤样本

尽量减少操作时间。去除血液(预冷PBS 淋洗数次) 干扰,置液氮速冻,-80℃保存。

微生物及菌类样本

收集10^7 个/例细菌或500mg/例菌丝于离心管内,若菌丝无法判断具体量,可以黄豆粒大小为标准,迅速液氮速冻,-80℃保存。

植物样本

建议粉碎后称重,液氮速冻,-80℃保存。也可寄送未粉碎样品。

 

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